非洲猪瘟检测系列

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深圳真瑞非洲猪瘟荧光定量PCR试剂盒

发布时间:2022-06-28 13:59:44人气:100

【作用与用途】用于血液、血球粉、淋巴结、脾脏、扁桃体中非洲猪瘟病毒核酸的检测。

【用法与判定】

1 用法

1.1 样品处理

血液样品直接用;淋巴结、脾脏、扁桃体样品,用无菌的剪刀和镊子剪取待检样品 2.0g 于研

钵中充分研磨,再加 10.0mL PBS(pH7.2,含 1 万单位青霉素和 1 万单位链霉素)混匀(样品不足

2.0g 按 1:5 比例加 PBS),对处理的待检样品置 70℃,30 分钟灭活后,3000r/min,4℃离心 5 分钟,

取上清液,编号备用;血球粉处理同上,只不过省掉研磨步骤。

1.2 样品存放

采集或处理好的样品在 2℃~8℃条件下保存应不超过 24h;若需长期保存,须放置-80℃冰箱,

但应避免反复冻融(冻融不超过 3 次)。

1.3 操作步骤

1.3.1 病毒 DNA 的提取

病毒 DNA 的提取推荐使用本公司生产的非洲猪瘟病毒荧光 PCR 检测试剂盒(A 盒),操作步骤

参照说明书。如客户自备提取试剂,请参考相应提取试剂的使用说明书进行操作。提取好的 DNA

须在 2h 内进行 PCR 扩增,若需长期保存须放置 -80℃冰箱,但应避免反复冻融。

1.3.2 荧光 PCR 扩增

(1)从试剂盒取出荧光 PCR 反应液、Taq 酶,室温融化后,2000r/min 离心 5 秒。设所需 PCR

管数为 n(n=样本数+1 管阴性对照+1 管阳性对照),每个测试反应体系需要 20µL 荧光 PCR 反应液

和 0.5µl Taq 酶。计算好各试剂的使用量,加入一适当体积小管中,充分混合均匀后,向每个 PCR

管中各分装 20µL。

(2)分别向上述 PCR 管中加入 1.3.1 中制备的 DNA 溶液各 5µL,盖紧管盖,500r/min 离心 30

秒。

(3)将加样后的 PCR 管放入荧光 PCR 检测仪内,作好标记。反应参数设置:

第一阶段,预变性 95℃/3 分钟。

第二阶段,95℃/10 秒,60℃/30 秒共 45 个循环。荧光收集在第二阶段每次循环的 60℃延伸

时进行。

2 判定

2.1 结果分析条件的设定

阈值设定原则:根据仪器噪声情况进行调整,以阈值线刚好超过阴性对照品扩增曲线的最高点

为准。对于多通道荧光 PCR 仪,选定 FAM(465-510)检测通道读取检测结果,ABI 仪器选择 FAM

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